Stratégie globale pour la chromatographie liquide haute performance : des principes aux précautions opérationnelles

Chromatographie liquide haute performance

La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est une technique analytique utilisant un liquide comme phase mobile. Il pompe un solvant unique ou un solvant mélangé, un tampon et d'autres phases mobiles à travers un système de perfusion à haute pression dans une colonne chromatographique contenant une phase stationnaire. Dans la colonne chromatographique, les composants de l'échantillon sont efficacement séparés en raison de différentes forces d'interaction avec la phase stationnaire et la phase mobile. Par la suite, ces composants séparés entrent dans le détecteur pour une analyse détaillée, réalisant ainsi une analyse complète de l'échantillon.

Le principe repose sur la différence de rapport de répartition du mélange entre liquide-solide ou deux liquides non miscibles. Cette méthode est particulièrement adaptée à l’analyse de substances à point d’ébullition élevé, difficiles à vaporiser, thermiquement instables et biologiquement actives. Dans le même temps, la chromatographie liquide à haute performance s'est également largement répandue dans l'analyse chirale, fournissant un soutien technique important à la recherche dans les domaines de la chimie, de la biologie et de la médecine.

Étapes opératoires de la chromatographie liquide haute performance

Démarrage de l'équipement : Tout d'abord, allumez tour à tour les interrupteurs d'alimentation de l'ordinateur et du chromatographe pour démarrer l'instrument.

Connectez-vous au poste de travail : Connectez-vous au poste de travail de chromatographie liquide pour préparer les opérations ultérieures.

Configuration et réglage des paramètres : Après avoir sélectionné la configuration de l'instrument, effectuez les réglages des paramètres nécessaires, tels que le rapport de phase mobile, la sensibilité du détecteur, etc.

Auto-test de l'instrument et établissement de la méthode : démarrez l'auto-test de l'instrument pour vous assurer que l'instrument est en bon état. Après avoir réussi l'autotest, établissez les méthodes correspondantes basées sur les exigences expérimentales.

Équilibre du système : avant de commencer la collecte de données, assurez-vous que le système fonctionne dans des conditions définies pendant une période de temps pour atteindre un état d'équilibre.

Collecte de données : lorsque la ligne de base est stable, effectuez une injection manuelle. Cliquez sur l'icône Démarrer sur l'interface de collecte de données pour commencer la collecte de données. Après la collecte, enregistrez le fichier de chromatographie.

Analyse des données et sortie du rapport : sélectionnez la fonction d'analyse des données sur l'interface principale et ouvrez le fichier de chromatographie pour le traitement et l'analyse. Une fois l'analyse terminée, le rapport est généré et le test est terminé.

Arrêt et nettoyage : Avant l'arrêt, laissez la machine fonctionner suffisamment longtemps et lavez entièrement la colonne avec la phase mobile pour vous assurer qu'il n'y a aucun résidu avant d'arrêter la machine.

Précautions d'utilisation de la chromatographie liquide

Fonctionnement sûr : évitez toujours tout contact direct de vos mains avec l'aiguille et les zones susceptibles d'entrer en contact avec l'échantillon pour garantir la sécurité personnelle et la propreté de l'instrument.

Opération de lavage de l'aiguille : Avant d'aspirer un échantillon, l'aiguille doit être soigneusement lavée avec de l'éthanol ou du méthanol pour éliminer d'éventuelles impuretés ou résidus.

Éliminer les bulles d'air : pendant le processus d'échantillonnage de la seringue, assurez-vous qu'aucune bulle d'air n'est mélangée. Les bulles d'air peuvent être éliminées en pointant l'aiguille vers le haut et en effleurant le tube de l'aiguille tout en maintenant la vitesse d'aspiration appropriée.

Vitesse et profondeur d'insertion : l'insertion doit être rapide et stable pour garantir que la vitesse et la profondeur de chaque injection d'échantillon restent cohérentes, ce qui est la clé pour garantir l'exactitude des résultats d'analyse.

Injection d'échantillon : lorsque la pointe de l'aiguille est insérée dans la chambre de vaporisation jusqu'au milieu, l'injection d'échantillon doit être démarrée pour garantir que l'échantillon peut être entièrement vaporisé et analysé efficacement.

Vérifiez les fuites d'air : S'il s'avère que la pression de la chambre de gazéification chute, que la forme du pic devient plus basse ou que la largeur devient plus grande, cela peut être dû à une fuite d'air. À ce stade, la bague d'étanchéité doit être remplacée à temps pour rétablir le fonctionnement normal de l'instrument.

Classification des aiguilles d'injection : Les aiguilles d'injection des chromatographes gazeux et liquides ne peuvent pas être mélangées. Les chromatographes en phase gazeuse utilisent des aiguilles pointues, tandis que les chromatographes liquides utilisent des aiguilles plates. Le mélange peut endommager l’instrument ou entraîner des résultats d’analyse inexacts.

Stabilité des paramètres : pendant le processus de test, la stabilité des paramètres de l'instrument doit être maintenue et les paramètres doivent être évités à volonté pour garantir l'exactitude des résultats d'analyse.

Sécurité des données : n'utilisez pas votre propre clé USB pour copier des données afin de garantir la sécurité et l'intégrité des données.